کیت الایزای anti dsDNA

کیت سنجش آنتی بادي IgG علیه dsDNA به روش الایزا
حیطه کاربرد:
کیت الایزاي IgG dsDNA-anti پیشتاز طب، براي سنجش کمی و نیمه کمی حضور آنتی بادیهاي IgG علیه عامل DNA دو رشته اي در سرم یا پلاسماي انسان طراحی
شده است. از این کیت به عنوان یک ابزار کمک تشخیص در بیماران لوپوس اریتماتوز سیستمیک (SLE (همراه با سایر تظاهرات بالینی به کار می رود. محتواي این کیت
تنها براي تشخیص آزمایشگاهی می باشد.

مقدمه:
لوپوس اریتماتوز سیستمیک (SLE (یک بیماري خود ایمن سیستمیک می باشد که با تولید اتوآنتی بادي ها و بروز طیف گسترده اي از تظاهرات بالینی شناخته می شود. حضور آنتی بادي ها
علیه DNA دو رشته اي (dsDNA (معیاري براي تشخیص SLE محسوب می گردد. رویکرد عملی در غربالگري اولیه بیماران استفاده ازروشی مانند ELISA است کههر دو نوع آنتی بادي
هاي با افینیتی پایین و بالا ضد dsDNA را شناسایی می کند. یکی از مشکلات روش ELISA واکنش آنتی بادیها با DNA تک رشتهاي (ssDNA (است. آنتی بادیهاي ضد ssDNA فقط
DNA تک رشته اي را می شناسند. این نوع از آنتی بادي ها نه تنها در بیماران مبتلا به SLE بلکه در سایر بیماریهاي بافت همبند ماننداسکلروز سیستمیک و میوزیت هم مشاهده می شود.
بنابر این، استفاده از dsDNA بسیار خالص وهمچنین هضم ssDNA با استفاده از نوکلئاز 1S استراتژیهاي اساسی در تولید ELISA با کیفیت مناسب هستند. بر مبناي استفاده از روش هاي
مختلف، شیوع آنتی بادي علیه DNA دو رشته اي بین 20الی 80درصد بیماران SLE گزارش شده است. به علت فراوانی بالا، حساسیت مناسب (%57) و ویژگی بالا (%70-80)، حضور این
آنتی بادي ها می تواند به عنوان مارکر سرولوژي مهمی در تشخیص SLE محسوب گردد.همچنین پس از تشخیص قطعی SLE، سنجش دوره اي آنتی بادي علیه DNA دو رشته اي براي
پایش دوره هاي بالینی بیماران ضروري می باشد زیرا افزایش تیتر آنتی بادي علیه DNA دو رشته اي می تواند پیش بینی کننده شعله ور شدن بیماري باشد. از طرفی حضور آنتی بادي علیه
DNA دو رشته ایی با نوع شدید بیماري همراه با درگیري کلیوي مرتبط می باشد و افزایش تیتر آنتی بادي ها ممکن است پیش بینی کننده عود بیماري باشد. آنتی بادي هاي علیه DNA دو
رشته اي زیر کلاس هاي مختلفی دارند. اکثر آنتی بادي هاي پاتولوژیک در SLE از کلاس IgG می باشند. از این رو کیت الایزاي IgG dsDNA-Anti پیشتازطب، براي سنجش
کمی و نیمه کمی حضور آنتی بادیهاي IgG علیه عامل DNA دو رشته اي می تواند به عنوان یک ابزار کمک تشخیص در بیماران SLE همراه با سایر تظاهرات بالینی به
کار برده شود.
اساس آزمایش:
اساس آزمایش در این کیت روش الایزاي غیر مستقیم (indirect (می باشد. در این کیت چاهکهاي پلیت توسط dsDNA خالص پوشانده شده اند. براي کوتینگ از روش
منحصر به فردي براي اتصال پایدار dsDNA به کف چاهک استفاده شده است تا از نتایج کاذب پرهیز شود. در هنگام آزمایش، نمونه هاي رقیق شده به داخل چاهکها ریخته
میشوند. در صورت وجود آنتی بادي علیه آنتی ژنهاي dsDNA این آنتی بادي ها به آنتی ژنهاي کف چاهک متصل می گردند. پس از شستشو با افزودن آنتی بادي ضد IgG
که به آنزیم HRP متصل شده، در صورت وجود آنتی بادیهاي ضد dsDNA از نوع IgG، آنتی بادي نشاندار شده نیز به آنها متصل می گردد. پس از شستشو، محلول رنگزا
داخل چاهکها ریخته می شود که شدت رنگ آبی، متناسب با کمپلکس ایمنی تشکیل شده در چاهکها است. افزودن محلول متوقف کننده، رنگ آبی را به زرد تبدیل
می نماید که بهترین جذب نوري را در طول موج 450 نانومتر دارد.
محتویات کیت:
1) یک عدد پلیت داراي 96عدد چاهکهاي پوشش داده شده با آنتی ژنهاي dsDNA

2) محلول رقیق کننده نمونه (Diluent Sample(: دو ویال50 میلی لیتري حاوي محلول جهت رقیق کردن نمونه ها (آماده براي مصرف-آبی رنگ)
3) سري استانداردها (Set Standard (: شامل 4 ویال 1 میلی لیتري از استاندارد با غلظتهاي0‚100‚400‚ 800 ml/IU از dsDNA-Anti کالیبره شده در مقابل استاندارد
مرجع 15/174 :NIBSC سازمان بهداشت جهانی (آماده براي مصرف-سبز رنگ)
4) محلول آنزیم کونژوگه آماده مصرف (Conjugate Enzyme(: یک ویال 12 میلی لیتري حاوي محلول آنتی بادي ضد IgG انسانی متصل شده به آنزیم پراکسیداز
(آماده براي مصرف-قرمز رنگ)
5) سرم کنترل بالا (Control High(: یک ویال 1 میلی لیتري حاوي محلول بافري، داراي پروتئین به عنوان پایدار کننده و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ و سرم
انسانی غیر فعال شده، حاوي آنتی بادي IgG علیه dsDNA) آماده براي مصرف-بنفش رنگ). غلظت دقیق کنترل روي ویال ذکر شده است.
6) سرم کنترل پایین (Control Low(: یک ویال 1 میلی لیتري حاوي محلول داراي بافر فسفات و %0/05 کاتن به عنوان ماده محافظ و سرم انسانی منفی از نظر آنتی
بادي IgG علیه dsDNA) آماده براي مصرف- زرد رنگ)
7) محلول رنگزاي یک مرحله اي (Substrate-Chromogen(: یک ویال 12 میلی لیتري حاوي تترامتیل بنزیدین و آب اکسیژنه (آماده براي مصرف- بی رنگ)
8) محلول شستشو (Buffer Wash(: یک ویال 50 میلی لیتري حاوي محلول شستشوي غلیظ (x10 (داراي محلول بافر فسفات و %0/05 توئین، جهت تهیه محلول
شستشوي آماده مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت 1/10 رقیق نمایید.
9) محلول متوقف کننده (Solution Stop(: یک ویال 12 میلی لیتري حاوي اسیدکلریدریک 1 نرمال
10) یک عدد برچسب مخصوص پلیت
11) دستورالعمل مصرف
مواد و وسایل مورد نیاز که در کیت موجود نمی باشند:
1) دستگاه الایزاریدر داراي فیلتر 450 نانومتر (و در صورت امکان 630 نانومتر به عنوان فیلتر رفرانس)
2) سمپلرهاي دقیق و کالیبره 10 ، 100 و 1000 میکرولیتري و سر سمپلرهاي مخصوص یکبار مصرف
3) لوله آزمایش براي رقیق سازي
4) کاغذ نمگیر
5) آب مقطر
نکات قابل ذکر براي مصرف کنندگان:
1) محتویات این کیت تنها براي مصرف در همین کیت قابل استفاده هستند.
2) تمامی محتویات کیت تنها براي استفاده تشخیصی در آزمایشگاه می باشند.
3) تنها پرسنل آموزش دیده بایستی از این تست استفاده نمایند.
4) این کیت صرفا جهت اندازه گیري آنتی بادي هاي ضد dsDNA در سرم و پلاسماي انسانی طراحی و ساخته شده است.
5) از مخلوط کردن محتویات کیتها با شماره ساختهاي مختلف جداً خودداري نمایید.
6) کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود HBsAg و آنتی بادیهاي HCV وHIV کنترل گردیده اند و فاقد این عوامل می باشند، جهت احتیاط بهتر
است کاربرانی که با کیت کار میکنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند.

7) نمونه بیماران، استانداردها، کنترلها و چاهکهاي استفاده شده، باید به عنوان پسماندهاي عفونی در نظر گرفته شوند. تمام محلولهاي واکنش گر و معرفها باید مطابق با
مقررات ملی دفع پسماندهاي عفونی امحاء شوند .
شرایط نگهداري:
1) کیت را در یخچال بین دماي 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداري نمایید.
2) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداري نمایید.
3) پایداري محتویات کیت تا پایان مدت انقضاي نوشته شده بر روي هر یک از آنها می باشد.
4) ممکن است در محلول شستشوي غلیظ کریستال تشکیل شود که این امر مشکلی را ایجاد نمی نماید. قبل از تهیه محلول شستشوي کار، براي حل شدن کریستالها، ویال را در
37 درجه سانتی گراد قرار دهید. محلول شستشو را به نسبت 1/10 با آب مقطر رقیق نمایید. این محلول (آماده مصرف) به مدت یک هفته در شرایط -8 2 درجه سانتی گراد
قابل نگهداري و مصرف می باشد.
جمع آوري و آماده سازي نمونه:
سرم یا پلاسما را می توان پس از جدا نمودن از سلولهاي خون استفاده نمود، نمونه می تواند براي مدت دو روز در دماي 2-8 درجه سانتیگراد نگهداري شود ولی براي
نگهداري بیش از دو روز باید از دماي -20 درجه سانتی گراد استفاده گردد (درضمن باید از thaw-Freeze نمودن نمونه پرهیز شود). از نمونه هاي مشکوك به آلودگی
میکروبی جهت انجام آزمایش استفاده نشود.
آماده سازي اولیه نمونه ها:
نمونه ها را با کمک محلول رقیق کننده نمونه به نسبت 1 به 101 رقیق کنید (10 میکرولیتر نمونه با 1000 میکرولیتر محلول رقیق کننده نمونه).توجه: کنترلهاي کیت آماده
مصرف بوده و نیازي به رقیق سازي ندارند.
توضیحات عمومی:
1) قبل از شروع مراحل آزمایش تمام مواد و نمونه ها باید به درجه حرارت اتاق برسند. پلیت را بعد از رسیدن به دماي محیط از کیسه مخصوص آن خارج کرده و چاهک
هاي مورد نیاز را بردارید.
2) به محض شروع آزمایش کلیه مراحل باید بدون توقف انجام پذیرند. از خشک شدن چاهک ها در بین مراحل انکوباسیون پرهیز شود.
3) حتما از نوك سمپلر یکبار مصرف براي هر نمونه استفاده شود .
4) پس از افزودن محلول متوقف کننده، جذب نوري چاهکها حداکثر تا نیم ساعت قابل قرائت می باشد .
5) براي کسب نتایج مطلوب باید شستشوي چاهکها به صورت کامل صورت گرفته و آخرین قطرات پس از شستشو از چاهکها تخلیه شوند .
6) از مهمترین فاکتورها در حصول نتیجه مطلوب، زمان انکوباسیون مناسب می باشد. بنابراین پیشنهاد می گردد قبل از شروع آزمایش تمام مواد و محلولهاي مورد نیاز را
آماده نموده و درب آنها را باز کنید، این عمل با کاهش فاصله زمانی بین مراحل سمپلینگ باعث نتایج دقیقتر می شود .

مراحل انجام آزمایش:
1) تعداد چاهکهاي مورد نظر را انتخاب کرده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداري پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .
2) 100 میکرولیتر از هر استاندارد، سرم هاي کنترل و نمونه هاي آماده شده را طبق دستور زیر در چاهکها بریزید.
براي سنجش کمی، اولین چاهک براي بلانک، چهار چاهک بعدي براي استانداردهاي مختلف، دو چاهک بعدي به ترتیب براي سرم کنترل پایین و بالا و سایر چاهکها را براي
نمونه ها استفاده کنید، پیشنهاد می گردد استانداردها و نمونه ها به صورت دوپلیکیت استفاده شود و در انتها میانگین جذب نوري آنها براي محاسبه نتایج استفاده گردد.
براي سنجش نیمه کمی، اولین چاهک براي بلانک، چاهک بعدي براي استاندارد (استاندارد ml/IU 100(، دو چاهک بعدي به ترتیب براي سرم کنترل پایین و بالا و سایر
چاهکها را براي نمونه ها استفاده کنید. پس از پوشاندن درب چاهکها توسط برچسب مخصوص پلیت، چاهکها را به مدت 60 دقیقه در دماي اتاق (22-28 درجه سانتی گراد)
انکوبه نمایید.
3) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را 5 بار با محلول شستشوي آماده مصرف بشویید. براي شستشو چنانچه دستگاه واشر اتوماتیک در دسترس نباشد می توان از
سمپلر 8 کاناله استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش گردد. در هر
دفعه شستشو حدود 300 میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهکها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهاي عملیات شستشو، چاهکها را
درحالت وارونه و با ضربات ملایم بر روي یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند .
4) 100 میکرولیتر از محلول آنزیم کونژوگه (Conjugate Enzyme (آماده مصرف را به داخل چاهکها بریزید. پس از پوشاندن چاهکها توسط برچسب مخصوص پلیت،
چاهکها را به مدت 30 دقیقه در دماي اتاق (22-28 درجه سانتی گراد) انکوبه نمایید .
5) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را 5 بار با محلول شستشوي آماده مصرف بشویید (همانند بند 3).
6) 100 میکرولیتر محلول رنگزا (Substrate-Chromogen (به هر چاهک اضافه نمایید. چاهکها را به مدت 15 دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی قرار دهید .
7) با اضافه کردن 100 میکرولیتر محلول متوقف کننده (Solution Stop (به هر چاهک واکنشهاي آنزیمی را متوقف نمایید. براي سنجش جذب نوري هر چاهک از دستگاه
الایزاریدر با فیلتر nm 450 استفاده نموده و جذب نوري چاهکها را قرائت نمائید. توصیه می شود از فیلتر nm630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد .
ارزشیابی آزمایش:
این آزمایش با داشتن شرایط زیر ارزشمند و قابل گزارش تلقی می گردد:
– در روش کمی جذب نوري استاندارد صفر و ml/IU 800 به ترتیب کمتر از 0/1 و بیشتر از 1/2 و براي روش نیمه کمی جذب نوري استاندارد 100 بیشتر از 0/1 قابل قبول
است.
– جذب نوري بلانک کمتر از 0/1 قابل پذیرش است.
محاسبه نتایج:
از هر دستگاه الایزاریدر با قابلیت سنجش جذب نوري در طول موج nm 450 می توان استفاده نمود .
نتایج نیمه کمی:
1) جذب نوري استانداردها، کنترلها و نمونه ها را به کمک دستگاه الایزاریدر در طول موج nm 450 و در صورت امکان در مقابل فیلتر رفرانس nm 630 بخوانید .
2) نتایج با محاسبه نسبت میانگین جذب نوري نمونه یا کنترل به جذب نوري استاندارد شماره 2 (ml/IU 100 (محاسبه می گردد. فرمول زیر براي محاسبه نسبت استفاده
می گردد :

ایندکس=

جذب نوري کنترل یا نمونهبیمار
جذب نوري استاندارد شماره 2
تفسیر نتایج به صورت زیر صورت می گیرد:
منفی 1.0 > ایندکس
مثبت 1.0 ≤ ایندکس

نتایج کمی:
1) جذب نوري استانداردها، کنترلها و نمونه ها را به کمک دستگاه الایزاریدر در طول موج nm 450 و در صورت امکان در مقابل فیلتر رفرانس nm 630 بخوانید .
2) با استفاده از میانگین جذب نوري استانداردها و غلظت معلوم آنها نموداري (point to Point (رسم کنید به این صورت که جذب نوري استانداردها را روي محور عمودي
(Y (و غلظت آنها را روي محور افقی (X (برده و نقطه تلاقی غلظت و جذب نوري را براي هر استاندارد بدست آورید، سپس نقاط بدست آمده را به یکدیگر وصل نمایید تا
منحنی بدست آید .
3) میانگین جذب نوري براي هر نمونه را بدست آورده و روي محور عمودي جاي آن راپیدا کنید، سپس نقطه مذکور را توسط خطی به منحنی وصل نمایید بطوریکه این خط
بر محور عمودي کاملاً عمود باشد و بعد از محل تلاقی خط و منحنی، خطی عمود بر محور افقی وارد کنید، نقطه تلاقی این خط با محور افقی مقدار غلظت را نشان خواهد
داد .
Anti-dsDNA IgG Standard Curve
توجه: جذبهاي نوري و منحنی مربوطه فقط به عنوان نمونه می باشد و هر آزمایشگاه در هر دفعه انجام آزمایش باید منحنی جدیدي رسم نماید.
0
0.5
1
1.5
2
0 200 400 600 800 OD (450/630 nm)
Concentration (IU/ml)
استانداردها
(IU/ml)
جذب نوري
( 450/630 nm )
0 0.01
100 0.22
400 0.94
800 1.9

مقادیر مورد انتظار:
مقادیر قابل انتظار در سرم افراد طبیعی که توسط تستهاي مکرر به روش الایزا بدست آمده به قرار زیر می باشد ولی پیشنهاد می گردد که هر آزمایشگاه مقادیر نرمال خود را
بدست آورد:
<100 IU/ml منفی
≥100 IU/ml مثبت
شاخصهاي اجرایی:
1) مطالعه مقایسه ایی :
کیت سنجش آنتی بادي IgG علیه dsDNA شرکت پیشتاز طب با نمونه سرم هاي تایید شده با دو کیت تجاري مربوطه مقایسه شدند. نمونه هاي مثبت از جمعیت بیماران
مراجعه کننده به یکی از مراکز ریفرال درمان بیماران روماتولوژیک انتخاب شدند. نتایج در جداول مربوطه آمده است.
تعداد نمونه مقایسه ایی (451)
جمع – + کیت رقابتی الایزاي سنجش dsDNAIgG-anti
کیت سنجش آنتی بادي IgG علیه
dsDNA پیشتاز طب زمان
+ 136 5 141
– 12 298 310
451 303 148 جمع
نتایج تست هاي مقایسه ایی بروي نمونه هاي ذکر شده بیانگر حساسیت: ،%91/9 اختصاصیت: %98/35 و صحت: %96/2 براي کیت شرکت پیشتاز طب است.
2) حداقل مقدار قابل اندازه گیري:
بر اساس جذب نوري استاندارد صفر و سه برابر انحراف معیار (SD (مرز شاهد (LoB (در این کیت ml/IU 7.6 می باشد. بر اساس جذب نوري نمونه با غلظت پایین آنالیت و
سه برابر انحراف معیار (SD (حداقل غلظت قابل تشخیص آنتی بادي IgG علیه dsDNA در این کیت ml/IU 30 می باشد.
3) دقت آزمایش:
جهت بررسی تکرارپذیري کیت، آزمون هاي دقت درون سنجی (در یک کیت) و میان سنجی (بین چند کیت از یک سري ساخت) بوسیله سه نمونه سرمی با غلظت هاي
متفاوت آنتی بادي IgG علیه dsDNA انجام شد که نتایج آن در جداول مربوطه آمده است.

جدول -1 آزمون دقت درون سنجی (assay -Intra (:
CV % SD (IU/ml) (IU/ml) میانگین تکرارتست دفعات تعداد
نمونه 1 20 53.49 5.03 9.40
نمونه 2 20 379.57 7.23 1.90
نمونه 3 20 613.61 15.51 2.53
جدول -2 آزمون دقت میان سنجی (assay -Inter (:
CV % SD (IU/ml) (IU/ml) میانگین تست تکرار دفعات تعداد
نمونه 1 20 62.94 6.48 10.30
نمونه 2 20 321.82 24.5 7.61
نمونه 3 20 640.65 35.74 5.60
4) ریکاوري آزمایش:
سه نمونه سرم با مقادیر معلوم از آنتی بادي IgG علیه dsDNA به 3 سرم با غلظتهاي مشخص آنتی بادي IgGعلیه dsDNA افزوده شد و ریکاوري آنها محاسبه گردید که
نتایج آن در جدول زیر آمده است:
* جهت تست ریکاوري از استاندارد هاي کیت استفاده نشود .
جدول -3 ریکاوري:
نمونه
anti-dsDNA IgG مقدار
موجود در سرم (ml/IU(
مقدار
Anti-dsDNA IgG
افزوده شده (ml/IU(
مقدار مورد
(IU/ml) انتظار
مقدار بدست
(IU/ml) آمده
ریکاوري
(%)
39.25 1 96.4 80.73 83.73 128.21
301.82 2
119.4 601.7 503.75 705.68
678.46 3
108.1 424.35 392.47 106.48
5) خطی بودن آزمایش:
به کمک محلول رقیق کننده نمونه رقتهاي متوالی 3 نمونه سرم با غظت مشخص از IgG dsDNA-anti تهیه گردید و نتایج بر اساس ضریب رقت و درصد ریکاوري
محاسبه شد که در جدول زیر نتایج آن آورده شده است.

جدول -4 خطی بودن:
مقدار IgG dsDNA-anti موجود در سرم رقیق نمونه
(IU/ml) نشده
ریکاوري (%)
رقت 1/2 رقت 1/4 رقت 1/8
115.5 117.5 108.0 708.38 1
115.4 116.9 112.5 755.9 2
93.9 94.9 100.5 577.79 3
6) واکنش متقاطع:
واکنش متقاطعی سرمی با سرم هاي مثبت از نظر آنتی بادي هاي علیه اسکلرودرما ( تعداد= 20) و ارتریت روماتوئید ( تعداد= 12) مشاهده نشد.
References:
Isenberg D. Anti-dsDNA antibodies: still a useful criterion for patients with systemic lupus erythematosus? Lupus. 2004;13(11):881- 5.
Petri M, Orbai AM, Alarcón GS, et al. Derivation and validation of theSystemic Lupus International Collaborating Clinics
classification criteria forsystemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum. 2012;64(8):2677-86.
Zigon P, Lakota K, Cucnik S, et al. Comparison and evaluation of different methodologies and tests for detection of anti-dsDNA
antibodies on 889 Slovenian patients’ and blood donors’ sera. Croat Med J. 2011;52(6):694-702.
Pisetsky DS, Lipsky PE. New insights into the role of antinuclear antibodies in systemic lupus erythematosus. Nat Rev Rheumatol.
2020;16(10):565-579.
Bragazzi NL, Watad A, Damiani G, Adawi M, Amital H, Shoenfeld Y. Role of anti-DNA auto-antibodies as biomarkers of response to
treatment in systemic lupus erythematosus patients: hypes and hopes. Insights and implications from a comprehensive review of the
literature. Expert Rev Mol Diagn. 2019;19(11):969-978.
Wichainun R, Kasitanon N, Wangkaew S, et al. Sensitivity and specificity of ANA and anti-dsDNA in the diagnosis of systemic lupus
erythematosus: a comparison using control sera obtained from healthy individuals and patients with multiple medical problems.
Asian Pac J
Allergy Immunol. 2013;31(4):292-8.
Conti F, Ceccarelli F, Perricone C, et al. Systemic Lupus Erythematosus with and without Anti-dsDNA Antibodies: Analysis from a
Large Monocentric Cohort. Mediators Inflamm. 2015;2015:328078.
Cozzani E, Drosera M, Gasparini G, Parodi A. Serology of Lupus Erythematosus: Correlation between Immunopathological
Features and Clinical Aspects. Autoimmune Dis. 2014;2014:321359.
Rekvig OP. The dsDNA, Anti-dsDNA Antibody, and Lupus Nephritis: What We Agree on, What Must Be Done, and What the Best
Strategy Forward Could Be. Front Immunol. 2019;10:1104.
Ho A, Magder LS, Barr SG, Petri M. Decreases in anti-double-stranded DNA levels are associated with concurrent flares in patients
with systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum. 2001;44(10):2342-9.
Villalta D, Bizzaro N, Bassi N, et al. Anti-dsDNA antibody isotypes in systemic lupus erythematosus: IgA in addition to IgG anti- dsDNA help to identify glomerulonephritis and activedisease. PLoS One. 2013;12;8(8):e71458.

روش انجام آزمایش آنتی بادي IgG علیهdsDNA به صورت شماتیک
نمونه ها را با کمک محلول رقیق کننده نمونه به نسبت 1 به 101رقیق کنید .
چاهکهاي کوت شده با آنتی ژن هاي اختصاصی dsDNA
کنترل ها – 100 میکرولیتر – استانداردها 100 میکرولیتر – – محلولها استانداردها کنترل ها نمونه
نمونه آماده شده – – 100 میکرولیتر
دهانه چاهک ها را با چسب مخصوص پلیت بپوشانید و آن را به مدت 60 دقیقه در دماي اتاق انکوبه نمایید. برچسب پلیت را
برداشته و محتویات چاهکها را خالی کنید. طبق دستور شستشو، 5 بار چاهکها را بشویید.
آنزیم کونژوگه 100 میکرولیتر 100 میکرولیتر 100 میکرولیتر
دهانه چاهک ها را با چسب مخصوص پلیت بپوشانید و آن را به مدت 30 دقیقه در دماي اتاق انکوبه نمایید. برچسب پلیت را
برداشته و محتویات چاهکها را خالی کنید. طبق دستور شستشو، 5 بار چاهکها را بشویید.
محلول رنگزا 100 میکرولیتر 100 میکرولیتر 100 میکرولیتر
پلیت را به مدت 15 دقیقه در دماي اتاق و در تاریکی قرار دهید .
محلول متوقف کننده 100 میکرولیتر 100 میکرولیتر 100 میکرولیتر
جذب نوري چاهکها را در مقابل بلانک و در طول موج 450 نانومتر (و در صورت امکان 630 نانومتر به عنوان فیلتر رفرانس)
قرائت کنید.